關于液氮研磨的步驟分析

　　液氮研磨原理：分子生物學是當前生命科學領域的前沿學科，其理論與技術已滲透到各學科領域，而分子生物學實驗在生命科學研究中顯得相當重要。在實際工作中，許多實驗材料比如動物身上的肌肉組織、結締組織、骨組織、毛發(fā)組織等，植物的根、莖、葉、種子等均需磨碎,隨后才能對其成分、基因與蛋白質及結構和功能進行研究。
 

　　液氮研磨在分子生物學實驗中應用廣泛，特別是有關核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)的分離。液氮的溫度為一196℃，它既能使各種組織成分不易被破壞或降解，又能使組織變硬，脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的溫度極低,操作時要特別小心。
 

　　液氮研磨步驟：
 

　　1、將研缽從烘箱內拿出，用專用容器盛一些液氮備用；
 

　　2、將液氮小心加入并浸滿研缽，浸泡預冷研杵與研缽(加入液氮時，緩慢加入，防止液氮飛濺)；
 

　　3、當第一次加入的液氮揮發(fā)*后，立即向研缽中緩慢加入約1/2研缽體積的液氮(若組織塊較大或較多的情況下可浸滿研缽)，將組織迅速轉移至液氮內，確保組織全部浸沒在液氮中；
 

　　4、使用研杵在液氮中輕輕敲打組織，將組織打碎成小塊，要注意切勿用力過度，要防止組織塊飛濺出研缽；在液氮即將揮發(fā)完時，使用研杵對組織樣本進行碾壓研磨(注意，若為植物樣本可直接用研杵碾壓組織)；
 

　　5、待液氮揮發(fā)完后，立即加入1/3研缽體積的液氮(注意，加入液氮速度要緩慢，切勿使得液氮沖擊力過大，將組織樣本沖出研缽)，迅速用研杵研磨組織，根據組織狀態(tài)的變化程度，在確保組織始終處于冰凍狀態(tài)下，及時補充液氮進行研磨，(一般30s~1min補充一次，至少需要補充3次以上)，直至組織被研磨成粉末狀。
 

　　6、當組織研磨成粉末狀后立即加入合適體積的裂解液進行組織裂解，若裂解液凍于研缽內壁，用研杵輕輕敲擊下來，繼續(xù)研磨讓組織粉末與裂解液充分混合，研磨成糊狀后進行下一個樣本的取樣操作；
 

　　7、靜置至樣本和裂解液混合物融化，將已經融化成液體狀態(tài)的樣本轉移至離心管中，插入冰塊上暫存。